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温度校准
wdjz.ybzhan.cn仪表网旗下（样本碱水解法）
玻璃试管，移液器，可见光分光光度计，可调到 95℃左右的恒温水浴箱（或者铝锅内放几个 去掉盖子的易拉罐，将罐壁及底部穿数十个孔，以便水的进入，用来代替水浴箱。），离心机。
二、操作步骤： 样本前处理：
1、样本水解：
①、血清（浆）：取 0.5ml 血清（浆）准确加水解液 1ml，混匀。放试管中加盖后，95℃或 者沸水浴水解 20 分钟。
②、尿液（培养液）：取 1.0ml 尿液（培养液）准确加水解液 1ml，混匀。放试管中加盖后，
95℃或者沸水浴水解 20 分钟。
③、组织：称取组织湿重 30～100mg 放入试管中，准确加水解液 1ml，混匀。加盖后
95℃或者沸水浴水解 20 分钟（水解 10 分钟时混匀一次，目的是使水解更充分）。
2、调 PH 值至 6.0～6.8 左右。
①、将各试管流水冷却后各管加指示剂 1 滴，摇匀；
②、各管准确加入调 PH 甲液 1.0ml，混匀（此时溶液应为红色）；
③、用 200μl 的加样器吸取调 PH 的乙液向各管内逐滴小心加入调 PH 的乙液，每滴加入后 均要混匀*，直至液体中指示剂的颜色变成黄绿色**。此时 PH 值在 6.0～6.8 左右（约 加入调 PH 乙液 100μl～500μl 左右）；
* 加调 PH 乙液时，每加一滴均要混匀，为防止液体外溢，如果没有带盖的玻璃磨口试管，可用普通
玻璃试管代替，每次混匀时可用塑料薄膜或冰箱保鲜膜压住试管口，充分旋涡混匀即可。
**若您的样本是细胞培养液，因其中含有酚红，所以液体中的混合指示剂在 PH 为 6.0～6.8 左右时为 橙黄红色，而不是黄绿色。
④、然后加蒸馏水至 10ml，混匀；
⑤、取 3～4ml 稀释的水解液加适量活性炭（约 20～30mg 左右，以上清液离心后澄清无色 为准），混匀，3500 转/分离心 10 分钟，小心取上清 1ml 作检测。
操作表：
|
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
| 蒸馏水（ml） | 1.0 |
|
|
| 5µg/ml 标准应用液（ml） |
| 1.0 |
|
| 检测液（ml） |
|
| 1.0 |
| 试剂一（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀，静置 10 分钟
| 试剂二（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀，静置 5 分钟
| 试剂三（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀，60℃水浴 15 分钟，冷却后，3500 转/分离心 10 分钟，取上清在 550nm 处，1cm 光 径，蒸馏水调零，测各管吸光度。
1
三、计算与举例：
（一）、血清（浆）的计算与举例：
1、计算公式：
羟*含量 测定管吸光度 − 空白管吸光度 标准管含量 水解液总体积（ml ）
= × ×
（ug / ml）
标准管吸光度 − 空白管吸光度
（5ìg/ml）
取样量（ml ）
（二）、尿液的计算与举例：
1、计算公式：
羟*含量 测定管吸光度 − 空白管吸光度 标准管含量 水解液总体积（ml ）
= × ×
（ug / ml）
标准管吸光度 − 空白管吸光度
（5ìg/ml）
取样量（ml ）
（三）、组织的计算与举例：
1、计算公式：
羟*含量 测定管吸光度 − 空白管吸光度 标准管含量 水解液总体积（10ml ）
= × ×
（ug / mg湿重）
标准管吸光度 − 空白管吸光度
（5ìg/ml）
组织湿重（mg ）
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